ELISA: dekodiranje, metode

Razvojem srodnih znanosti kao što su genetika, molekularna biologija, kemija, kao i rast tehničkog napretka, moderna medicina može se pohvaliti inovativnim metodama za dijagnosticiranje različitih bolesti čovjeka. Odlikuju ih visoka točnost rezultata i sigurnost izvedbe. Jedan od tih načina identificiranja zdravstvenih problema je imunoanaliza enzima. U proteklom je desetljeću stekao široku popularnost i stekao reputaciju visoko učinkovite, pouzdane i sigurne metode za otkrivanje bolesti čak i prije pojave vanjskih simptoma. Jasno ćemo objasniti što je ova vrsta dijagnoze, što je načelo njezina djelovanja, uočiti prednosti, orijentirati je na cijenu takve analize.

Reakcija organizma na patogenu floru

Kako bi razumjeli kako, zahvaljujući imunoanalizi enzima, laboratorijski tehničari dijagnosticiraju različite bolesti, potrebno je razumjeti fiziološki proces koji se događa u tijelu tijekom infekcije. Kada patogen uđe u krvotok, ljudski imunološki sustav pokazuje zaštitnu reakciju u obliku oslobađanja određenih tvari - antitijela. Vežu se na stanicu i analiziraju je li ona dio tijela ili ugrađena izvana. ako imunološki sustav određeno da je stanica stranac, tada količina antitijela počinje rasti kako bi se borila protiv patogenog mikroorganizma.

Antitijela su različitih tipova, imaju svoje osobine. Neke se tvari pojavljuju izravno u razdoblju infekcije, druge ostaju tijekom života u ljudskom tijelu i zahvaljujući njima razvijaju snažan imunitet na određenu bolest. Strukture proteina dijele se na takve vrste: A, D, E, M, G. U medicini se antitijela nazivaju imunoglobulini. Stoga je uobičajeno označiti izvedbu tih tvari latiničnim slovima Ig.

enzimski imuno analiza (ELISA) Temelji se na podacima iz medicinskog znanja. Pomoću posebnih antigena u laboratoriju možete odrediti prisutnost ili odsutnost određenih antitijela u biološkom materijalu. Prema rezultatima ove analize, liječnik može postaviti dijagnozu, kao i utvrditi ne samo prisutnost patologije, nego i trajanje njenog nastanka, kako bi utvrdio razinu opasnosti za pacijenta. U enzimskom imunotestu, češće se ispituje prisutnost protutijela skupina M i G.

Što je ELISA test?

Zapravo, imunoanaliza enzima nije inovacija modernog društva. Izumio je još 80-ih godina. No, za takve studije potrebna je glomazna i skupa oprema. Stoga se ova metoda koristila samo u posebno opremljenim znanstvenim laboratorijima: koristila se za tipizaciju stanica i tkiva. Ali u to vrijeme nije se naširoko koristila u dijagnostičkoj medicini, bilo ju je tehnički teško i izuzetno skupo koristiti. Samo s razvojem tehnologije i izumom biopolimernih materijala, ELISA se poboljšala. Nakon toga metoda je postala popularna i stekla povjerenje u medicinske krugove.

Kao što je gore spomenuto, ova metoda uključuje detekciju u biomaterijalu - krvi, amnionskoj tekućini, staklastom tijelu ili cerebrospinalnoj tekućini - određenim skupinama imunoglobulina.

Postoje studije bez primjene antigena na površinsku i enzimski vezanu imunosorbnu analizu, koja uključuje provođenje reakcije u posebnim bušotinama. Potonja metoda ima veću osjetljivost i pouzdanost, te se na taj način analiziraju u medicinskim laboratorijima za otkrivanje bolesti ljudi.

Faza imunoanaliza

Ovisno o namjeravanoj bolesti, enzimski imunološki komplet koristi potreban antigen, koji će tijekom kemijske reakcije u prisutnosti infekcije kontaktirati patogenu floru. Taj se proces naziva provođenje imunološkog odgovora.

Zatim, kako bi se vizualno odredio rezultat studije, provoditi enzimsku fazu ELISA. To uključuje bojenje materijala pomoću posebnih reagensa. Enzimi kao što su alkalna fosfataza, peroksidaza i avidin koriste se u ovom istraživanju. Ovisno o rezultirajućoj boji u procesu izvođenja kemijskih reakcija i određivanju rezultata enzimskog imunotestiranja.

Što je kolorimetrija?

Analiza enzimske faze dijagnoze provodi se metodom koja ima naziv "kolorimetrija". Činjenica je da ne samo boja materijala daje informacije o infekciji, već i gustoću boje koja je rezultat kemijskih reakcija. Ovaj pokazatelj određuje koncentraciju patogena. Ako se ručna metoda dijagnostike koristi na starinski način, tada se konstruira poseban kalibracijski grafikon za određivanje naznačenih pokazatelja.

U suvremenim laboratorijima, ručna metoda se danas rijetko koristi. Za analizu ELISA-e koristi se poseban uređaj - kolorimetar u kojem se ručno podešavaju samo parametri studije, a zatim uređaj automatski obavlja sve radove, uključujući crtanje.

ELISA metode

Postoje izravne i neizravne metode enzimskog imunotestiranja. Prvi tip traje manje vremena jer ima samo tri faze provedbe. Prvo se antigenima ispitivanog materijala dodaju specifična antitijela, koja se stavljaju u posebne bunare. Zatim uklonite njihov višak i provedite enzimsku fazu analize, čime se dobije rezultat.

Indirektna metoda se koristi mnogo češće, jer ima veću osjetljivost u usporedbi s izravnom metodom dijagnoze. Prilikom provedbe dvostrukog istraživanja koristi se. Naime - prvo, antigen je povezan s neobilježenim antitijelima, a zatim s označenim. Ovaj proces traje više vremena, ali rezultat je najtočniji.

Kompleti reagensa

Kompleti za imuno testiranje proizvode različiti proizvođači, u različitim razinama opreme. U Rusiji je priznata tvrtka Unija biomedicinskih. Ovaj proizvođač proizvodi setove reagensa za proučavanje metodom ELISA-e gotovo svih uobičajenih infekcija u našim geografskim širinama, koje se mogu analizirati na ovaj način. Uz same reagense, kompleti sadrže i dodatne materijale, što osigurava sigurnost, praktičnost i brzinu analize. Osim toga, kemijske tvari su obojene u različitim bojama, što smanjuje vjerojatnost pogrešaka u izboru reagens laboratorija.

Kemijsko-biološki setovi se razlikuju u relativnoj dostupnosti, što izravno utječe na distribuciju i dostupnost enzimskog imunološkog testa za populaciju.

Prednosti dijagnostičke metode

Bez sumnje, imunoanaliza enzima ima nekoliko prednosti u usporedbi s drugim dijagnostičkim metodama:

1. Uz njegovu pomoć može se odrediti i mala prisutnost patogenih organizama, što ukazuje na visoku osjetljivost testa.
2. Mogućnost otkrivanja bolesti u najranijim fazama, što značajno povećava šanse za uspješan oporavak.
3. Jednostavnost i praktičnost uzimanja biološkog materijala. Ova se analiza provodi iu privatnim laboratorijima iu javnosti. Ako je potrebno, medicinska sestra može uzeti materijal od pacijenta kod kuće.
4. Za analizu je potrebna vrlo mala količina biomaterijala.
5. Brzi rezultati. Moderna medicinska oprema omogućuje vam analizu unutar jednog dana.
6. Sposobnost otkrivanja skrivenih asimptomatskih oblika infekcije.
7. Studija dostupnosti.
8. Ako je potrebno, moguće je provesti masovna istraživanja uporabom ove metode.
9. Postoji mogućnost praćenja tijeka bolesti i djelotvornosti propisanog liječenja, jer je moguće ELISA analizu provesti mnogo puta apsolutno sigurno za pacijenta.
10. Automatizacija faza analize koja eliminira ljudski faktor i povećava pouzdanost rezultata.
11. Reagensi za izvođenje IFA skladišteni su dovoljno dugo - oko godinu dana.
12. Analiza je moguća uz fluktuacije temperature okoline.

Skupina M imunoglobulina

Antitijela skupine M proizvodi imunološki sustav odmah nakon detekcije stranog antigena. Prema tome, ako je imunoanaliza enzima dovršena otkrivanjem takvih tvari u biomaterijalu, to ukazuje na akutni stadij bolesti, primarnu infekciju. Imunoglobulini grupe M mogu biti u tijelu do mjesec dana, ovisno o vrsti infekcije. Tada se njihov broj smanjuje do potpunog izumiranja.

Grupa G imunoglobulini

Zamijenjena imunoglobulinskom skupinom M pojavljuju se proteinske strukture oblika G. Ove tvari proizvode snažnu, u većini slučajeva, doživotnu imunitet na bolest. Određivanje proteinske strukture IgG u ispitivanom materijalu pokazuje da se tijelo prethodno susrelo s patogenom i da ima zaštitnu reakciju protiv reinfekcije.

Indikacije za dijagnozu

Enzimski imunotest se koristi za određivanje različitih zaraznih bolesti, hormonskih stanja i alergijskih testova. Naime:

• odrediti razinu hormona štitnjače;
• pokazatelji reproduktivnog hormonskog panela;
• tumorski biljezi;
• detektirati infektivne agense kao što su citomegalovirus, hepatitis, toksoplazma, rubeola, ospice, tuberkuloza, klamidija, sifilis, mikoplazma, ureplazma, candida, giardia, pa čak i HIV;
• se dijagnosticiraju autoimune bolesti. Uključujući često se koristi za proučavanje hormona štitnjače enzimski imunosorbentni test: TSH, TG, T3 i T4.

Osim u dijagnostičke svrhe, metoda imunoanaliza enzima koristi se u medicinskim istraživačkim aktivnostima.

Kako se uzima materijal?

U većini slučajeva preporučuje se uzimanje uzoraka venske krvi. Nakon obrade i pripreme materijala za ispitivanje, provodi se imunotest. krvni serum ili plazme.

Proučavanje hormonalne ploče zahtijeva posebnu pažnju, jer je u ovom slučaju iznimno važno uzeti u obzir značajke unosa materijala. Na primjer, za dijagnozu većine hormona ženskog reproduktivnog sustava potrebna je uzimanje venske krvi u određene dane menstrualnog ciklusa. Na brojne druge hormone utječu vanjski čimbenici: sezonalnost, doba dana, psihološko stanje pacijenta i još mnogo toga. Ne uzimajući u obzir specifične čimbenike, možete dobiti lažni rezultat, koji će dovesti do pogoršanja bolesti ili nepravilno propisanog liječenja.

U nekim, češće kompliciranim slučajevima, cerebrospinalna tekućina, staklasto ili amnionska tekućina trudnice može biti potrebna za analizu. Postupci prikupljanja tih bioloških materijala nose određeni rizik, imaju kontraindikacije i razdoblje oporavka. Stoga bi se trebalo provoditi samo prema svjedočenju liječnika i pod njegovim stručnim nadzorom enzimski imunotest. Dekodiranje u ovom slučaju zahtijeva posebno medicinsko znanje i može potrajati neko vrijeme.

Priprema za analizu

Potrebno je provesti enzimski imunotest, pridržavajući se svih preporuka, budući da vanjski čimbenici utječu na rezultate istraživanja. Primjerice, važno je uzeti jutarnju krv na prazan želudac (do 11 sati). 2 tjedna prije namjeravanog sakupljanja materijala, morate prestati uzimati bilo kakve lijekove, osobito hormonske. Nekoliko dana prije studije trebalo bi se suzdržati od uporabe alkohola i masne hrane, kao i eliminirati fizičke napore, iskustva i stres.

Rezultati dekodiranja

Dekodiranje rezultata enzimskog imunološkog testa zahtijeva posebno poznavanje posebnosti proteinskih struktura (antitijela), koje su opisane gore (IgG i IgM). Sukladno tim podacima analiziraju se istraživački pokazatelji. Tablica opisuje opcije koje se mogu dobiti tijekom analize:

Analizirajući prikazanu tablicu, možemo zaključiti da će u većini slučajeva biti potrebne dodatne studije kako bi se potvrdila dijagnoza. Ne može dati jasan odgovor samo na enzimski imunotest. Norma u ovom slučaju nema jasne granice: detektirani proteini skupine G ukazuju samo na to da je organizam prethodno bio podvrgnut infekciji određenim patogenom. Ali isti rezultat može ukazivati ​​na prisutnost akutne faze - važno je usporediti mnoge čimbenike i pokazatelje kako bi se postavila ispravna dijagnoza.

Čimbenici rizika

ELISA je 90% točna. Ipak, postoje faktori rizika koji utječu na narušavanje dijagnostičkog rezultata: kvar na opremi, nepravilno prikupljanje materijala, njegovo skladištenje i transport te zanemarivanje drugih vanjskih čimbenika.

Ne preporučuje se obavljanje dijagnostike nakon transfuzije krvi, hemolize, operacije, biopsije ili punkcije biološkog materijala - to također može utjecati na rezultate pokazatelja.

Trošak analize

Trošak dijagnostičke studije ima veliki raspon i ovisi o vrsti analize i antigenu koji se treba odrediti, budući da se na temelju tih faktora izračunava trošak kompleta reagensa i određuje složenost analize. Ali u većini slučajeva ELISA je dostupna mnogim pacijentima. Njegova cijena se kreće od 300 p. do 2000 str.

ELISA je pristupačna, brza i vrlo učinkovita metoda za dijagnosticiranje velike liste bolesti. Ali samo kvalificirani medicinski stručnjak ima pravo baviti se tumačenjem rezultata i dijagnoze.